pcr退火温度的影响因素是什么?

PCR退火温度受引物长度影响，引物越长，退火温度越高。GC含量同样关键，GC比例高时退火温度需提高。模板浓度和纯度也会影响退火效果，浓度过高或杂质多会导致非特异性结合。

反应体系中的离子浓度，如镁离子，能改变退火温度，镁离子浓度升高时，退火温度需相应调整。酶的种类和活性同样重要，不同聚合酶的最佳退火温度存在差异。实验中需综合考虑这些因素，确保扩增特异性。